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凍干工藝及優(yōu)化-蛋白 2020-08-06

冷凍干燥作為蛋白類藥物干燥常用的方法，能保持蛋白類藥物的活性，干燥后能保持原形，體積幾乎不變，凍干藥品疏松多孔，呈海綿狀，復水性好。藥品脫水*能長期保存。想要凍干藥品復水性好并且能長期保存，凍干工藝及優(yōu)化很重要，例舉幾個方面如冷凍干燥過程中凍結(jié)中形成的冰晶形態(tài)和大小以及玻璃化程度不光影響干燥效率，還影響凍干藥品的質(zhì)量。在凍結(jié)過程中要考慮配方、凍結(jié)速率、凍結(jié)方式以及是否退火等問題。配方中如果固體含量少于2%，藥品的性能就會不穩(wěn)定，尤其在干燥過程中，藥品微粒不能粘在基質(zhì)上，溢出的... 查看更多
熒光PCR凍干之Tris 2020-08-05

Tris又叫三羥甲基氨基甲烷。是一種白色結(jié)晶或粉末，溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，是一種有刺激性的化學物質(zhì)。其本身有很高的緩沖能力，在水中溶解度高，對很多酶呈惰性反應(yīng)，它的這一特性使得Tris成為用于許多生化目的非常滿意的緩沖液。用于穩(wěn)定反應(yīng)體系的pH，在pH7.5-9.0之間有較強的緩沖能力。其緩沖液的低離子強度特點可用于線蟲核纖層蛋白的中間纖維的形成。其本身也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些藥物的中間物。熒光PCR凍干體系優(yōu)化... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之甘油 2020-08-03

多元醇類凍干保護劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側(cè)金盞花醇等，這一類凍干保護劑是比較常用較為普遍的凍干保護劑。以甘油作為凍干保護劑來介紹一下在蛋白質(zhì)凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力，可以進入細胞內(nèi)部和胞內(nèi)大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分，從而維持蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質(zhì)的原有結(jié)構(gòu)。此外，甘油還可以起到降低細胞脫水皺縮和緩解復水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團，均能產(chǎn)生“優(yōu)先水化作用”以及改變體系的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變溫度等，... 查看更多
熒光PCR凍干之二糖 2020-08-02

二糖又名雙糖,雙糖是碳水化合物的一種。它是由兩個單糖分子經(jīng)縮合反應(yīng)除去一個水分子而成的糖。例如乳糖由葡萄糖和半乳糖組成，蔗糖由葡萄糖和果糖組成，麥芽糖由兩個葡萄糖組成等。二糖作為常用的凍干保護劑，能夠有效增加蛋白凍干穩(wěn)定性，但是用它們作保護劑得到的無定形蛋白凍干固體具有較低的Tg，對儲存過程中的高溫和高濕條件耐受較差。大分子量糖能夠增加凍干后固體的Tg，增加凍干后穩(wěn)定性，但是對于低濃度蛋白活性保護作用不理想。例如蔗糖對蛋白質(zhì)具有保護作用，葡聚糖在冷凍和干燥過程中不能防止蛋白質(zhì)... 查看更多
熒光PCR凍干之聚合物 2020-08-02

聚合物又稱加聚物。由一種單體經(jīng)聚合(加聚)反應(yīng)而成的產(chǎn)物。分子具有重復的結(jié)構(gòu)單位。包括晶態(tài)結(jié)構(gòu)、非晶態(tài)結(jié)構(gòu)、取向態(tài)結(jié)構(gòu)以及織態(tài)結(jié)構(gòu)。聚合物包括聚乙二醇、PVP、明膠、聚乙烯亞胺等。聚合物常用作為蛋白質(zhì)的冷凍保護劑，通常聚合物的穩(wěn)定作用取決于聚合物的多重性質(zhì),如優(yōu)先從蛋白質(zhì)表面析出、表面活性、使蛋白質(zhì)溶液私度升高從而阻止其他小分子(如糖及多輕基化合物)的結(jié)晶、抑制冷凍過程中pH值的劇烈變化等。不同聚合度及濃度的聚合物所提供的保護作用不同,如聚合度大的PvP有著較高的玻璃化溫度,... 查看更多
熒光PCR凍干之氨基酸 2020-08-01

氨基酸是含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。目前發(fā)現(xiàn)的天然氨基酸就有300多種，基本氨基酸也有二十個品鐘。氨基酸應(yīng)用于食品行業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)、化妝品行業(yè)等。氨基酸是常見的蛋白質(zhì)保護劑之一。在冷凍過程中,低濃度的甘氨酸可通過抑制10或100mmol/L磷酸緩沖鹽結(jié)晶所致pH值的改變而阻止蛋白質(zhì)藥物變性。無定型甘氨酸可阻止凍干過程中重組人生長激素的聚集;結(jié)晶型甘氨酸能升高成品的塌陷溫度,阻止因塌陷而引起的蛋白質(zhì)藥物的破壞。常用的氨基酸類蛋白質(zhì)保護劑有脯氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸... 查看更多
熒光PCR之探針法 2020-07-28

熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質(zhì)探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高，區(qū)別染色體上一個堿基的突變；由于其鏈短，分子量小，雜交時間較短（僅需1-2小時），可預測雜交條件，可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆，獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低，也影響了檢測的敏感性，僅能檢出含很少的標本。cDNA探針以RNA為模板，用反... 查看更多
熒光PCR凍干之DMSO 2020-07-27

二甲基亞砜（DMSO）是一種有機化合物，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。具有高沸點、熱穩(wěn)定性好、與水混溶的特性?？勺饔袡C溶劑、反應(yīng)介質(zhì)和有機合成中間體。也可用作合成纖維的染色溶劑、去染劑、染色載體,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收劑。二甲基亞砜是一種既溶于水又溶于有機溶劑。廣泛用作溶劑和反應(yīng)試劑，具有很高的選擇抽提能力。二甲基亞砜是如何應(yīng)用的呢？下面簡單介紹下，DMSO是一種重要的滲透型細胞保護劑。培養(yǎng)液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%；1‰... 查看更多

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